ПЦР-лаборатория (Полимеразная цепная реакция)

ЗАДАНИЕ НА ПОДГОТОВКУ ПОМЕЩЕНИЙ ЛАБОРАТОРИИ ПЦР

Проект с учетом нормативных документов:

1.               СанПиН 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность»;

2.               Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)»

3.               Методические указания МУ 1.3.2569-09 "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 22 декабря 2009 г.)

4.               Временные методические рекомендации "Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19)" Версия 5 (08.04.2020) (утв. Министерством здравоохранения РФ)

Требования к размещению и территории лаборатории 

Помещения лаборатории допускается размещать в общественных зданиях при наличии отдельного входа. При отсутствии возможности размещения помещений лаборатории в виде отдельного блока допускается проведение исследований поступающего материала на базе действующей лаборатории (микробиологической, вирусологической, иммунологической и т.д.) при условии организации в ней самостоятельных или выделенных в составе других функциональных помещений рабочих зон, соответствующих этапам проведения анализа, поточности движения персонала и материалов.

Помещение для забора материала располагают за пределами блока помещений для исследований.

Лаборатории оборудуют двумя входами - для сотрудников и для получения материала. Допускается также получение материала через передаточное окно или передаточный шлюз.

Территория, на которой расположены лаборатории, должна иметь ограждение, препятствующее бесконтрольному проникновению посторонних лиц, охранную сигнализацию.

В целях предупреждения снижения естественной освещенности и инсоляции деревья на расстоянии не ближе 15 м., кустарники - 5 м. от светонесущих проемов зданий.

На расстоянии не менее 25 м. от окон размещают контейнерную площадку для отходов с твердым покрытием и въездом со стороны улицы. Размеры площадки должны превышать площадь основания контейнеров на 1,5 м. во все стороны. Контейнерная площадка должна быть защищена от постороннего доступа, иметь ограждение и навес.

Требования к зданию и помещениям

Двери всех помещений должны открываться наружу.

Структура, планировка и оборудование помещений должны обеспечивать поточность технологических процессов и исключать возможность перекрещивания потоков с различной степенью эпидемиологической опасности.

Помещения лаборатории должны иметь два входа: один – для сотрудников, другой – для доставки материала на исследование. Допускается получение материала через передаточное окно.  

Лаборатория в соответствии с этапами проведения анализа должна включать следующий набор последовательно расположенных самостоятельных рабочих зон (помещений) или отдельно выделенных рабочих зон в составе других функциональных помещений, количество которых определяется используемыми МАНК (Приложение 1):

- приема, регистрации, разбора и первичной обработки материала (Рабочая зона 1);

- выделения нуклеиновых кислот (Рабочая зона 2);

- проведения реакции амплификации и учета ее результатов при использовании гибридизационо-флуоресцентного метода детекции (Рабочая зона 3);

- учета результатов реакции амплификации нуклеиновых кислот методом электрофореза и (или) гибридизационно-ферментным методом детекции (Рабочая зона 4-1);

- учета результатов (детекции) продуктов амплификации нуклеиновых кислот методом секвенирования и (или) на ДНК-чипах (Рабочая зона 4-2).

В «чистой» зоне должны располагаться следующие помещения:

помещением для персонала;

помещение для хранения запаса диагностических препаратов);

подсобные помещения (туалет, душевая)

санитарная комната;

В «заразной» зоне должны размещаться:

помещение для приема и регистрации материала;

помещения для проведения исследований (предбоксы, боксы ПЦР);

помещение для обезвреживания и временного размещения отходов;

Рабочие помещения не должны быть проходными.

На границе "чистой" и "заразной" зон необходимо располагать санитарный пропускник, состоящий из помещения для личной одежды, душевой и помещения для рабочей одежды. На границе зон на входе в помещение душевой необходимо устанавливать герметичную дверь, на которую должен быть нанесён знак "Биологическая опасность".

Технологический процесс и набор помещений

Забор биосред на территории лаборатории не проводится. Материал доставляется транспортом МЦ в специальных маркированных закрытых контейнерах по мере необходимости. Санитарная обработка и дезинфекция контейнеров производится на территории лаборатории, обеспечивается наличие обменного фонда.

Режим работы лаборатории: с 08:00 до 20:00

Количество исследований в час на прилагаемом комплекте оборудования – 48

Количество исследований в смену – 432 (3 часа на прогрев детектора, технологические перерывы, дезинфекцию), при круглосуточном режиме работы – 864 исследования    

Количество сотрудников (при 12 часовом графике)  всего: 12

-      4 врача КЛД;

-      4 лабораторных техника;

-      2 администратора;

-      2  санитарки

Количество сотрудников в смену:

-      2 врача КЛД (по 6 часов);

-      2 лабораторных техника (по 6 часов);

-      1 администратор (12 часов);

-      1 санитарка (12 часов)

ЗОНА ПЦР

должна включать набор последовательно расположенных самостоятельных рабочих зон (помещений) или отдельно выделенных рабочих зон в составе других функциональных помещений:

- приема, регистрации, разбора и первичной обработки материала (Рабочая зона 1);

- выделения нуклеиновых кислот (Рабочая зона 2);

- проведения реакции амплификации и учета ее результатов при использовании гибридизационо-флуоресцентного метода детекции (Рабочая зона 3);

- учета результатов реакции амплификации нуклеиновых кислот методом электрофореза и (или) гибридизационно-ферментным методом детекции (Рабочая зона 4-1);

- учета результатов (детекции) продуктов амплификации нуклеиновых кислот методом секвенирования и (или) на ДНК-чипах (Рабочая зона 4-2).

В Рабочей зоне 1 осуществляют прием материала, его маркировку, регистрацию в специальном журнале, первичную подготовку (концентрирование материала путем центрифугирования, фильтрации, иммуносорбции, суспендирование, перевод сухих и плотных материалов в жидкую фазу и т.д.), объединение или разделение проб на аликвоты, обеззараживание и хранение проб, обеззараживание остатков исследуемого материала.

Допускается проведение в Рабочей зоне 1 приема, регистрации, разбора и первичной обработки материала, исследуемого другими методами диагностики (бактериологическими, вирусологическими, иммунологическими и т.д.).

В Рабочей зоне 2 проводят выделение и очистку нуклеиновых кислот микроорганизмов из проб, подготовленных в Рабочей зоне 1.

В Рабочей зоне 3 осуществляют приготовление реакционных смесей, проведение обратной транскрипции, амплификации нуклеиновых кислот и учет результатов амплификации при использовании гибридизационо-флуоресцентного метода детекции. Приготовление реакционных смесей для проведения обратной транскрипции и амплификации нуклеиновых кислот осуществляют до доставки в Рабочую зону 3 проб, подготовленных в Рабочей зоне 2.

В подзоне 3а (отдельное помещение) осуществляют приготовление реакционных смесей и проведение обратной транскрипции.

 В подзоне 3б проводят амплификацию нуклеиновых кислот и учет результатов амплификации при использовании гибридизационо-флуоресцентного метода детекции.

При необходимости, возможно совмещение Рабочей зоны 2 и Рабочей зоны 3 в одном помещении при наличии в нем отдельных боксов биологической безопасности II или III класса для каждой из рабочих зон.

!!! (Рабочие зоны 4-1 и 4-2 для проведения исследования на COVID-19 эти методы не применяются. Помещения можно не организовывать. Рабочие зоны 4-1 и 4-2 располагают изолировано от Рабочих зон 1-3 для предотвращения их контаминации продуктами амплификации через воздушный поток. Рабочая зона 4-1 предназначена для учета результатов продуктов амплификации нуклеиновых кислот методом электрофореза и (или) гибридизационно-ферментным методом детекции, а также очистки продуктов амплификации для секвенирования.Рабочая зона 4-2 предназначена для учета результатов (детекции) продуктов амплификации нуклеиновых кислот методом секвенирования и (или) на ДНК-чипах.При использовании различных методов учета результатов (детекции) продуктов амплификации нуклеиновых кислот (электрофорез, гибридизационно-ферментативный анализ, секвенирование и ДНК-чипы) в Рабочих зонах 4-1 и 4-2 выделяют отдельные рабочие подзоны или отдельные боксированные помещения (отдельные изолированные помещения) для каждого типа детекции. Объединение Рабочих зон 4-1 и 4-2 запрещено.)

ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ ПОМЕЩЕНИЯ

должны располагаться отдельно от рабочих зон (помещений) в соответствии с действующими санитарными правилами, регламентирующих обеспечение безопасности работ с микроорганизмами I-IV группы патогенности.

Необходимо предусмотреть наличие автоклавной комнаты для обеззараживания исследуемого материала, которая может быть общей с другими подразделениями учреждения при условии соблюдения требований биологической безопасности.

1.     моечная

Назначение: дезинфекция многоразовых предметов и ИМН;  хранение уборочного инвентаря и дезинфектантов;

Мебель: шкаф для хранения инвентаря; шкаф для хранения дезинфектантов;

Сантехника: моечный поддон; моечный блок на 2 чаши; слив медицинский с емкостью для сбора сточных вод

2.     санитарный шлюз

Назначение: Выход из грязной зоны в чистую

Оборудование, инвентарь: душ, умывальник, шкаф для хранения чистой одежды, бак для сбора грязной одежды

3.     комната персонала

Назначение: размещение личной  и рабочей одежды и обуви; переодевание сотрудников; прием пищи.

Мебель: шкаф для личной одежды и обуви; шкаф для рабочей одежды и обуви; диван /кушетка (при круглосуточном графике работы); стол обеденный; тумба для посуды; стулья

Бытовая техника: холодильник;  микроволновая печь; кулер; электрический чайник;

Сантехника: умывальник.

4.     санузел для персонала

сантехника: унитаз; раковина

5.               вспомогательное помещение (комната обеззараживания материала с автоклавом) совмещена с помещением для временного хранения отходов

Назначение: хранение отходов классов Б и В.

Оборудование: автоклав с объемом стерилизационной камеры 20 л, контейнер для хранения отходов; бак для жидких отходов

6.     склад реактивов /тест систем

Назначение: хранение реактивов и тест систем в фабричной невскрытой упаковке

учет сроков хранения, температурного режима

7.     комната анализа результатов

Назначение: регистрация направлений на анализы; регистрация результатов;

организация доставки

Оргтехника: компьютер; принтер радиотелефон (1 база – 2 трубки)

Мебель: стол письменный; стеллаж для документации

8.     коридор; Оборудование: тепловая завеса на входе

Площадь помещений, не указанных в таблице, определяется габаритами и расстановкой оборудования, числом лиц одновременно находящихся в помещении с соблюдением последовательности технологических процессов и нормативных расстояний, обеспечивающих рациональную расстановку оборудования и свободное передвижение персонала. Ширина проходов к рабочим местам или между двумя рядами выступающего оборудования не должна быть менее 1,5 м.

Допускается свободная ориентация окон помещений по сторонам света. Продолжительность инсоляции следует принимать с учетом требований санитарных норм по инсоляции и солнцезащите помещений жилых и общественных зданий и территорий. Для защиты от слепящего действия солнечных лучей и перегрева, окна, ориентированные на южные румбы горизонта, оборудуются солнцезащитными устройствами (козырьки, жалюзи).

Межэтажные перекрытия, перегородки, стыки между ними и отверстия для прохождения инженерных коммуникаций и проводок должны быть грызунонепроницаемыми.

Требования к внутренней отделке помещений

Для внутренней отделки используются материалы в соответствии с функциональным назначением помещений.

Поверхность стен, полов и потолков помещений должна быть гладкой, без дефектов, легкодоступной для влажной уборки и устойчивой к обработке моющими и дезинфицирующими средствами. При использовании панелей их конструкция также должна обеспечивать гладкую поверхность. В помещениях классов чистоты А и Б отделка должна обеспечивать влагостойкость на всю высоту помещения.

Покрытие пола должно плотно прилегать к основанию. Сопряжение стен и полов должно иметь закругленное сечение, стыки должны быть герметичными. При использовании линолеумных покрытий края линолеума у стен могут быть подведены под плинтуса или возведены на стены. Швы, примыкающих друг к другу листов линолеума, должны быть пропаяны.

В коридоре полы должны быть устойчивы к механическому воздействию (мраморная крошка, мрамор, мозаичные полы и другие).

Допускается применение подвесных, натяжных, подшивных и других видов потолков, обеспечивающих гладкость поверхности и возможность проведения их влажной очистки и дезинфекции.

В помещениях "заразной" зоны выступающие и проходящие трубы (батареи отопления) располагаются на расстоянии от стен с целью возможности проведения их дезинфекции, места ввода инженерных коммуникаций герметизируют и закрашивают под основное покрытие стен, пола или потолка. Для обеспечения надёжной герметизации стыков всех конструктивных элементов должны применяться упругие прокладки и строительные герметики, соответствующие условиям эксплуатации стыкуемых элементов конструкции и отвечающие требованиям пожарной безопасности.

Требования к водоснабжению и канализации

Помещения лаборатории должны быть оборудованы водопроводом, канализацией, централизованным горячим водоснабжением. Качество воды для хозяйственно-питьевого назначения должно соответствовать требованиям санитарных правил.

На случай выхода из строя или проведения профилактического ремонта системы горячего водоснабжения должно быть предусмотрено в качестве резервного источника водонагревательное устройство.

В кабинетах, комнате персонала, в туалетах и вспомогательных помещениях должны быть установлены умывальники с подводкой горячей и холодной воды, оборудованные смесителями с локтевым (бесконтактным, педальным и прочим не кистевым) управлением и дозаторами с жидким (антисептическим) мылом и растворами антисептиков.

Из помещений "заразной" зоны запрещается слив (сток) необеззараженных жидкостей и жидких отходов в канализационную сеть.   Помещения лаборатории оборудуются специальной канализацией, которая должна обеспечивать прием и транспортировку сточных вод, поступающих из санитарных пропускников, оборудования "заразных" зон, в сборные емкостные аппараты на тепловую обработку перед сбросом их в наружные сети канализации.

Сборные емкости для приема стоков, нагреватели и выдерживатели для термической обработки, а также насосы для перекачки стоков должны располагаться в "заразной" зоне.

Сбор сточных вод при непрерывном способе осуществляется в ёмкости с их последующей термической обработкой на установках непрерывной стерилизации

Система спецканализации - автономная система канализации помещений "заразной" зоны, транспортирующая загрязненные стоки к оборудованию станции обработки сточных вод. Станция обработки сточных вод - это комплекс оборудования, обеспечивающий сбор, обезвреживание, охлаждение и сброс сточных вод в наружные сети канализации. должны обеспечивать: соблюдение требований нормативно-технической документации, а также норм и правил пожарной безопасности; термическую (непрерывную или цикличную) обработку сточных вод из помещений "заразной" зоны; безнапорный сброс обработанных сточных вод в канализацию с температурой не выше 40°С;

У каждого приемника сточных вод, присоединяемого к сети канализации, предусматривается гидрозатвор. Конструкция гидрозатвора не должна допускать его опорожнения при появлении давления или разрежения в канализационной сети.

Устройство сети спецканализации должно исключать засорение системы и обеспечивать возможность очистки приемных люков. Сети спецканализации должны быть герметичными, замкнутыми, сообщаемыми с воздухом помещений "заразной" зоны линией, снабженной одной ступенью фильтров очистки воздуха. Обезвреживание фильтров очистки воздуха, установленных на воздушных линиях аппаратов и на воздушной линии сети спецканализации, производится химическим или термическим методами

Сборные емкости для приема стоков, нагреватели и выдерживатели для термической обработки, а также насосы для перекачки стоков должны располагаться в "заразной" зоне.

Сети канализации (трубопроводы и фасонные части) должны проектироваться открытыми, на сварке из нержавеющей стали с учётом требований прочности и коррозионной стойкости к дезинфицирующим растворам.

Система контроля параметров и управления технологическим процессом обработки сточных вод должна обеспечивать: световую и звуковую сигнализации, регистрацию и автоматическое поддержание на заданном уровне основных технологических параметров процесса (давление пара, подаваемого в установки обработки стоков, расхода стоков перед нагревателем, температуру стерилизации и давление после выдерживателя при непрерывном способе обработки, температуру и экспозицию обработки - при циклическом способе, уровень сточных вод в емкостях для сбора стоков).

Схема контроля и управления должна предусматривать наличие защитной автоматической блокировки, исключающей выход необработанных сточных вод при нарушении режима стерилизации и возвращение их на повторную обработку.

Требования к отоплению, вентиляции, микроклимату и воздушной среде

Нагревательные приборы должны иметь гладкую поверхность, исключающую адсорбирование пыли и устойчивую к воздействию моющих и дезинфицирующих растворов. Их следует размещать у наружных стен, под окнами. Должен быть обеспечен свободный доступ для текущей эксплуатации и уборки. В качестве теплоносителя используется вода с температурой в нагревательных приборах 70-85о С.

Помещения лаборатории должны быть оборудованы системами приточно-вытяжной вентиляции с механическим побуждением.

Система вентиляции должна быть отдельной от общей вентиляции здания.

Необходимо обеспечить выполнение нормативных требований к уровням шума и вибрации.

Проектирование вентиляционных систем должно исключать перетекание воздушных масс из «грязных» помещений в «чистые».

Относительная влажность не должна превышать 60%.

Допустимая температура и рекомендуемые кратности воздухообмена принимаются в соответствии с таблицей:

В комнате персонала и кабинета администратора допускается естественное проветривание.

В помещении воздух подается в верхнюю зону. Удаление воздуха предусматривается из верхней зоны.  

В целях обеспечения постоянных показателей заданных параметров воздуха, приточно-вытяжная система вентиляции должна быть укомплектована наряду с основными рабочими агрегатами дополнительными (резервными), работать в непрерывном режиме и быть обеспечена резервным комплектом оборудования с автоматическим (или ручным переключением).

Забор наружного воздуха для систем вентиляции и кондиционирования производится из чистой зоны на высоте не менее 2 м от поверхности земли. Наружный воздух, подаваемый приточными установками, подлежит очистке фильтрами грубой и тонкой очистки.

Выброс отработанного воздуха предусматривается выше кровли на 0,7м. Допускается выброс воздуха на фасад здания после очистки фильтрами соответствующего назначения.

Помещения "заразной" зоны лабораторий должны быть оборудованы системами приточно-вытяжной механической вентиляции, обеспечивающими:

- необходимые санитарно-гигиенические и микроклиматические условия;

- локализацию ПБА внутри технологических блоков;

- очистку удаляемого из рабочих помещений и от боксирующих устройств воздуха путем оснащения систем вытяжной вентиляции фильтрами очистки воздуха (далее - ФОВ) класса не менее H14 или сертифицированными специализированными установками, обеспечивающими фильтрацию не менее класса H14, а также непрерывную инактивацию микроорганизмов с эффективностью не менее 99%, задержанных фильтрами;

- очистку подаваемого в рабочие помещения воздуха фильтрами класса не менее H11;

- кратность воздухообмена не менее установленной нормативной документацией;

- направление воздушных потоков в сторону более "грязных" помещений;

- бесперебойную работу систем приточно-вытяжной вентиляции; автоматическое (или ручное) включение резервных вентиляторов при выходе из строя рабочих;

- создание и поддержание требуемой величины отрицательного давления (разрежения) относительно окружающей среды в рабочих и лабораторных помещениях.

- блокировку двигателей вентиляторов с электроприводами запорных устройств в составе каждой вентиляционной установки, оснащённой ФОВ;

Контролируемые параметры вентиляции:

- величина разрежения в помещениях "заразной" зоны не менее 50 Па (5 мм водяного столба); перепад давлений между помещениями не менее 50 ПА (5 мм водяного столба); контроль - постоянный;

- средняя скорость воздушного потока в открытых дверных проемах на границах зон в санитарных пропускниках лабораторий, не менее 0,4 м/сек; контроль - 1 раз в 6 месяцев;

- аэродинамическое сопротивление фильтров; контроль - постоянный;

- эффективность фильтрации воздушных фильтров; контроль - регулярно в соответствии с графиком организации;

- эффективность УОВ по инактивации микроорганизмов; контроль - постоянный.

Кондиционирование воздуха помещений "заразной" зоны допускается секциями охлаждения в составе приточных вентиляционных систем до фильтров очистки воздуха не менее класса H11-Н13 (в случае их наличия).

Установка оконных кондиционеров и Сплит-систем на границе помещений "заразной" и "чистой" зоны не допускается.

В существующих зданиях лабораторий, при отсутствии в помещении "заразной" зоны приточно-вытяжной вентиляции или фильтров очистки воздуха на выходе вытяжной вентиляции, допускается использовать боксы МБ II А2 класса.

Работы, связанные с высоким риском образования аэрозоля (большие объемы и высокая концентрация ПБА), проводят в боксах МБ III класса. Места ввода коммуникаций герметизируются.

Основные работы с ПБА I - II групп рекомендуется проводить в боксах микробиологической безопасности I, II или III класса, в зависимости от вида выполняемых работ.

Вытяжная вентиляция с механическим побуждением без устройства организованного притока предусматривается из помещений: душевых, санитарных узлов, помещений для временного хранения отходов и кладовых для хранения дезинфекционных средств, реактивов и других веществ с резким запахом.

Выброс отработанного воздуха от вытяжных устройств осуществляется самостоятельными каналами. Местные отсосы, удаляющие воздух из разных помещений, но с одинаковыми вредностями могут быть объединены в одну систему вытяжной вентиляции.

Для размещения оборудования систем вентиляции следует выделить специальные помещения, раздельные для приточных и вытяжных систем. Канальное вентиляционное оборудование возможно размещать за подшивным потолком в коридорах и в помещениях без постоянного пребывания людей.

Воздуховоды приточной вентиляции и кондиционирования должны иметь внутреннюю несорбирующую поверхность, исключающую вынос в помещения частиц материала воздуховодов или защитных покрытий.

Воздуховоды систем приточной вентиляции (кондиционирования воздуха) после фильтров высокой эффективности (Н11-Н14) предусматриваются из нержавеющей стали или других материалов с гладкой, коррозионностойкой, не пылящей поверхностью. Предусматривается скрытая прокладка трубопроводов, арматуры.

Приточные и вытяжные решетки должны быть максимально удалены друг от друга в пределах одного помещения.

ТРЕБОВАНИЯ К ВЕНТИЛЯЦИИ ПЦР И РАЗМЕЩЕНИЮ БОКСОВ ПЦР И БОКСОВ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОПАСНОСТИ

Имеющаяся вытяжная вентиляция из «заразной зоны» лаборатории должна быть изолирована от других вентиляционных  систем и оборудована фильтрами тонкой очистки воздуха (СП 1.2.731-99)

Помещения ПЦР лаборатории оборудуются приточно-вытяжной или вытяжной вентиляцией. Разница в давлении воздуха  в помещениях ПЦР – лаборатории достигается за счет различий в кратности воздухообмена в них.

Кратность воздухообмена должна соответствовать значениям:

Полностью исключить воздухообмен между помещением детекции продуктов амплификации и другими помещениями лаборатории!!!!